ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА В ВЕТЕРИНАРИИ
На сегодняшний день методы лабораторной диагностики в ветеринарии довольно многочисленны, и продолжают расширяться. Применяют их главным образом для подтверждения диагноза или его уточнения, установления причины болезни, для характеристики формы, тяжести течения и определения прогноза болезни, для выбора этиологической и патогенетической терапии, для оценки и контроля результатов лечения, а также для обнаружения патологии при скрининговых исследованиях.
Благодаря новейшему высокотехнологичному оборудованию и реактивам, лабораторная диагностика способна обеспечить выполнение как распространенных, так и самых редких анализов, и получить качественные и максимально информативные данные о процессах, происходящих в организме в самые короткие сроки.
Лабораторные анализы выполняются практически у всех больных животных и значительно чаще, чем другие дополнительные методы обследования.
Наиболее распространенной услугой лабораторной диагностики в ветеринарии является анализ крови, который помогает определить изменения в общем состоянии животного и функциональные характеристики большинства органов и систем.
Общий клинический анализ крови позволяет диагностировать большинство заболеваний крови (анемии, лейкозы и др.), а также оценить динамику воспалительного процесса, эффективность проводимого лечения, вовремя обнаружить развивающиеся побочные эффекты от применяемых препаратов.
Клинический анализ крови проводят на гематологических анализаторах (автоматические счетчики, основанные на кондуктометрическом методе) или ручным способом (камера Горяева) с целью подсчета клеток крови (лейкоциты, эритроциты, тромбоциты), а также оценки их размеров, структуры и цитохимических характеристик клеток, концентрации гемоглобина. Помимо количественных характеристик, общий анализ крови дает оценку и качественному составу клеток при помощи исследования мазка периферической крови при тысячекратном увеличении под микроскопом. Основная задача микроскопии мазка крови – это подсчет лейкоцитарной формулы, т.е. разделение лейкоцитов на популяции (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты, лимфоциты), оценка их степени зрелости и состояния клеток. Помимо лейкоцитарной формулы, оценивается и состояние эритроцитов (размеры, форма, наличие ядерных форм, насыщенность гемоглобином, наличие различных включений, в т.ч. паразитарного происхождения и пр.), а также качество тромбоцитов.
Для оценки регенераторной способности костного мозга при анемии проводят анализ на ретикулоциты. Процент ретикулоцитов оценивается при помощи микроскопии мазка, окрашенного специальным красителем.
Коагулометрия при помощи клоттинговых тестов (определение времени образования сгустка) позволяет оценить состояние свертывающей системы крови. На специальном автоматическом коагулометре измеряют протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), концентрацию фибриногена.
Биохимический анализ крови отражает функциональное состояние различных органов и систем организма животного. При биохимическом анализе крови исследуются ферменты (АСТ, АЛТ, щелочная фосфатаза, липаза, амилаза и др.), белки, небелковые азотистые компоненты (мочевина, креатинин), пигменты (билирубин), показатели углеводного (глюкоза, фруктозамин), липидного (триглицериды, холестерин) и водно-солевого обменов (натрий, калий, хлор, кальций, магний, фосфор и др.).
Для выполнения биохимического анализа используются специальные автоматические биохимические анализаторы, принцип работы которых основан на различных методах исследования, главным образом оптических (спектрофотомерия, флюорометрия и др.) Также широко применяют электрофорез (для определения белков), различные виды хроматографии, ионо-специфическую потенциометрию (для исследования уровня электролитов), иммуноферментный анализ и др.
Определение концентрации гормонов в крови является важнейшим способом оценки состояния эндокринных функций организма. С помощью иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови определяется уровень гормонов щитовидной железы (тироксин, трийодтиронин), половых гормонов (тестостерон, прогестерон, эстрадиол, ЛГ, ФСГ), кортикостероидных гормонов (кортизол) и др.
В ряде случаев определение гормонов проводят в условиях специфических нагрузок на организм животного, что позволяет оценить резервные возможности той или иной железы внутренней секреции или сохранность механизмов обратной связи. Например, для оценки функции коры надпочечников используют тест на стимуляцию АКТГ (адренокортикотропным гормоном), применимый для диагностики недостаточности коры надпочечников (гипоадренокортицизма) и гиперадренокортицизма, основанный на измерении концентрации кортизола в сыворотке крови до и после введения синтетического аналога АКТГ (синактена), стимулирующего надпочечники.
В других случаях концентрацию определяемого гормона, сопоставляют с содержанием его физиологического регулятора (например, тироксина (Т4) и тиреотропного гормона (ТТГ)), что способствует дифференциальной диагностике близких патологических состояний (например, первичного и вторичного гипотиреоза).
Помимо исследований крови, среди лабораторных методов в ветеринарии часто выполняется анализ мочи. Общий клинический анализ мочи позволяет оценить функцию почек и других внутренних органов, а также выявить воспалительный процесс в мочевых путях.
Исследование мочи состоит из физико-химического анализа, с помощью которого определяют цвет, прозрачность, относительную плотность, белок, глюкозу и кетоновые тела, и микроскопического исследования, позволяющего обнаружить эритроциты и лейкоциты, эпителиальные клетки, цилиндры, слизь, кристаллы и некоторые патологические микроорганизмы. Определение концентрации мочи (удельный вес, или относительная плотность мочи) проводится рефрактометрическим методом на специальном приборе.
Общий клинический анализ кала, или копрограмма позволяет оценить работу желудочно-кишечного тракта, выявить наличие воспалительных процессов, яиц гельминтов или простейших.
При помощи физико-химических методов определяют цвет, форму, запах, консистенцию, кислотность кала, наличие примесей (слизь, шерсть, членики гельминтов и пр.), а также наличие крови, билирубина, стеркобилина, крахмала, нейтрального жира и др. При микроскопическом исследовании определяют переваримость корма, наличие клеточных элементов (лейкоциты, эритроциты, эпителиальные клетки) и паразитов (яйца и личинки гельминтов, различные формы простейших).
Помимо копрограммы, яйца гельминтов и простейших в кале можно обнаружить при помощи такого метода, как овогельминтоскопия, в основе которого лежит принцип флотации и микроскопия.
Для обнаружения эктопаразитов (саркоптоз, нотоэдроз, хейлетиеллез, демодекоз, отодектоз и др.) и дерматофитов проводится исследование соскобов с кожи при помощи световой микроскопии. Этот метод достаточно информативен и выполнятся очень быстро.
Для видового определения дерматофитов (микроспория, трихофития) и выявления животных-носителей (без клинического проявления заболевания) необходимо сделать посев на специальные среды.
Для диагностики инфекционных заболеваний часто используют иммунологические методы исследования, основанные на образовании специфических иммунных комплексов из антигенов и антител. Используя специфические реакции, часто определяют наличие и титры антител к лептоспирозу (РМА), вирусному гепатиту (РДП), возбудителю токсоплазмоза и другим инфекциям, позволяя оценить устойчивость организма к различным инфекционным заболеваниям и прогнозировать развитие этих заболеваний, а также оценить эффективность вакцинации.
В настоящее время широкое применение в ветеринарии получили такие иммунологические методы как, иммуноферментный анализ (ELISA) и иммунохроматография (ИХ), позволяющие обнаружить антитела к определенным вирусам (например, к вирусу иммунодефицита кошек) в сыворотке крови, или антигены (такие как, парвовирус, вирус чумы плотоядных, вирус лейкемии кошек) в исследуемом образце.
Несмотря на многообразие методов лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, самым современным и точным является полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени. ПЦР очень чувствительна в определении возбудителей таких инфекций, как хламидиоз, микоплазмоз, калицивироз, инфекционный ринотрахеит, аденовироз, короновирусный энтерит, инфекционный перитонит кошек, вирусная лейкемия кошек, вирусный иммунодефицит кошек, парвовирусный энтерит, панлейкопения, чума плотоядных и др.
Метод ПЦР в реальном времени (PCR- real time) основан на принципе естественной репликации нуклеиновых кислот, который позволяет добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов ДНК в биологической пробе. Процесс ПЦР состоит из серии циклически повторяющихся реакций: денатурации ДНК, отжига зондов и синтеза ДНК (элонгации). Отсутствие стадии электрофореза позволяет минимизировать риск контаминации продуктами ПЦР и, таким образом, резко уменьшить число ложноположительных результатов, т.к. регистрация результатов проводится непосредственно в процессе полимеразной цепной реакции.
Бактериоскопические методы лабораторной диагностики проводят с целью исследования мазков-отпечатков с кожи, содержимого наружного слухового прохода, пустул и прочих образцов на наличие бактерий, грибов, паразитов и клеточного состава при помощи микроскопии. Это достаточно простой и быстрый способ лабораторной диагностики дерматологических заболеваний, но более точным методом остается бактериологический посев.
Бактериологический посев – это лабораторное исследование, направленное на выявление и идентификацию микроорганизмов, вызывающих заболевание, с определением их чувствительности к антибиотикам, для назначения правильного лечения или определения эффективности проведенного лечения.
Бактериологический посев чаще всего проводят при подозрении на инфекционно-воспалительные процессы в тканях и органах, которые в норме не содержат бактерий, поэтому важным условием для исследования является правильный забор исследуемого биологического материала, исключающий контаминацию образца.
Лабораторная диагностика в ветеринарии обладает широким спектром востребованных методов, обеспечивающих получение важной дополнительной информации, которая позволяет врачу точно поставить диагноз и назначить лечение.